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测序金标准之旅丨片段分析这么有用，您pick了吗？
在大多数片段分析应用中，待分析的未知DNA片段使用荧光标记的引物，通过PCR生成荧光标记的PCR产物并与分子量标准品混合。分子量标准品是使用与未知片段不同的荧光染料标记的已知大小的DNA片段混合物。
随后，使用热循环仪对该样品进行变性处理，我们推荐使用“Veriti”热循环仪，再将样品放在基因分析仪中进行分析。当已知和未知的DNA片段混合物进样到基因分析仪中，在毛细管迁移时会根据片段大小进行分离，较小的片段移动较快，而较大的片段移动较慢。
系统照相机根据所使用的染料对每个标记片段进行检测，所产生的荧光信号会生成一个峰，然后，使用GeneMapper软件分析电泳图中的峰。根据分子量标记物中每个已知DNA片段的分子量及其对应的迁移时间，生成分子量标准曲线，该曲线可用于精确确定未知片段的大小。
基因分析仪进行片段分析的一个非常大的优势，是它的多重分析能力。当您想要分析不同大小范围的DNA片段时，这些片段可用相同的染料标记并在毛细管中进行分离。然后再进行单独检测，这些都没有问题。但是当片段的分子量范围完全重叠或者部分重叠时，您将无法分辨哪个峰对应哪个片段，这就需要荧光多重分析能力。使用基因分析仪可以同时检测多个染料。因此，您可以使用不用染料标记大小范围相近的DNA片段。这些片段大小和荧光标记组合实现高水平的多重化，使您能够在单次迁移中分析多个片段。
使用基因分析仪进行片段分析的另一个优势，在于可实现的灵敏度。且不说您可以使用任何类型的DNA模板，您甚至可以使用血斑或者FFPE这样难分析的样品。与测序不同，大部分片段分析应用不需要在电泳前进行复杂的样品制备和纯化。而且，由于根据分子量大小进行结果确定，所以数据解读非常简单。您可以在基因分析仪上运行多种片段分析应用，并且不需要预先知道DNA序列。您还可以在相关定量应用中使用峰强度测量。
您只需要加入一点创造力，就可以随时开发一款自定义片段分析应用。
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