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骨髓基质细胞固紫B盐染色法
有研究表明，骨髓基质细胞（BMSC）在调控造血、组织修复及一些疑难疾病的治疗中具有重要意义。然而BMSC并不具备典型形态特征，且骨髓涂片中数量甚少，传统的wright-Giemsa法染色后于普通光镜下不易识别。应用单克隆抗体技术结合流式细胞仪、免疫细胞化学染色、荧光标记技术等可将其鉴别，但亦各有其局限性。
为此，龚旭波等人[1]建立了将固紫B盐应用于BMSC的特异性细胞化学染色方法。该方法简便快速，整个操作过程仅需30 min，染色明显，对陈旧标本也易着色，染色液配置后可较长时间保存，染色结果保留数月也不褪色，表明固紫B盐对BMSC染色具有较高的稳定性、特异性。
◆实验步骤
1．标本采集
吸取患者骨髓、胸腔积液或腹腔积液50 μL制成涂片。
2．溶液配制
固定液：95％乙醇溶液34.5 mL，40％甲醛溶液5.5 mL，蒸馏水1 mL混合而成；
1 g/L固紫B盐PBS溶液：50 mg固紫B盐粉末溶于50 mL PBS溶液，pH 7.2~7.6，4℃下保存；
苏木精复染液：苏木精2 g溶于250 mL无水乙醇中，硫酸铝10 g溶于750 mL蒸馏水中，两种溶液混合后加热煮沸2 min，再加入0.5 g碘酸钠和1 g柠檬酸，混匀。
3．固紫B盐染色
上述新鲜干燥标本于固定液固定30 s，小水流冲洗后晾干，置入1 g/L固紫B盐PBS溶液（pH 7.2~7.6），37℃水浴箱内置30 min，流水冲洗1 min，晾干后苏木精复染2 min，流水冲洗，待干。镜下观察细胞的着色情况及阳性BMSC形态特征。
◆染色效果
图a~d: 骨髓涂片
a~d图箭头所示为骨髓基质细胞胞质染为紫红色，胞核不着色，而其他细胞均无此染色特征（固紫B盐染色x1000）
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 包装 |
Fast Violet B Salt | Wako Special Grade | 1.5 g |
◆相关产品
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 包装 |
Ethanol(99.5) | for Molecular Biology | 100 mL | |
PBS(-) | for Cell Culture | 500 mL | |
Hematoxylin Monohydrate | for Cell Staining | 5 g | |
Aluminium Sulfate | Practical Grade | 500 g | |
Sodium Iodate | Wako Special Grade | 25 g | |
Citric Acid | Wako Special Grade | 25 g |
◆参考文献
[1] 龚旭波, 吴先国, 卢兴国, 等. 骨髓基质细胞固紫B盐染色法的建立及其临床意义[J]. 中华检验医学杂志, 2008,31(8):890-893.
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