皮肤为人体最大的器官，成纤维细胞是皮肤真皮层中主要细胞，而且是人体最容易获得的体细胞。人皮肤成纤维细胞不但能够促进表皮细胞的迁移、增殖和分化，还能分泌大量的胶原蛋白、弹性纤维蛋白及多种细胞修复因子，具有强大的自我更新能力，从而修复老化的皮肤。因此，已广泛应用于抗皮肤衰老、整形外科、组织工程皮肤等领域。

人成纤维细胞取材于健康的人体，临床标本经过彻底清洗避免污染，真皮层尽可能剪碎有利于成纤维细胞的迁出。形态上，成纤维细胞呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。体外培养的成纤维细胞多为梭形、多角形和扁平星形等，其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变。

人成纤维细胞形态

⭐ 下面介绍人成纤维细胞的原代培养方法

✔ 材料准备

◆ OriCell®人成纤维细胞（货号HXXFB-00001）

◆ OriCell®人成纤维细胞完全培养基（货号HXXFB-90011，套装内含基础培养基、优级胎牛血清和培养添加物）

✔ 实验步骤

（1）水浴锅37℃预热。完全培养基温浴到37℃。在15mL离心管中加入5mL以上完全培养基备用。

（2）从-80℃冰箱中取出细胞，放入37℃水浴锅中，快速晃动，使冻存液迅速融化。注意融化过程必须晃动冻存管，保证冻存液融化迅速、均匀；且晃动时应避免水没过管盖造成污染；管内冻存液融化至只剩一个约2mm直径的冰晶时，即停止水浴。继续晃动冻存管，至冰晶融化。

（3）用75%医用酒精擦拭冻存管外表面。

（4）在超净台中打开冻存管，用巴氏吸管或移液枪吸取细胞冻存悬液，转移至先前准备的离心管中。

（5）用1mL完全培养基洗涤冻存管1次，收集残留细胞，减少损失。

（6）细胞悬液以250×g，离心4min。

（7）离心后去除上清。加入2mL完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。

（8）将细胞接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养容器中。加入足量完全培养基，1个T25培养瓶中培养基总量不少于5 mL。

（9）摇匀细胞，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中。注意接种2h内不可移动、观察细胞。这会严重影响细胞贴壁，造成状态不佳、细胞聚团、贴壁不均匀等情况。

（10）复苏次日，观察细胞状态，并更换新鲜的完全培养基或传代。

（11）之后，每2天更换一次完全培养基，直到细胞生长至90%汇合，即需传代。通常OriCell®人成纤维细胞传代比例为1:3，72h内生长至可传代汇合度。请根据细胞实际生长情况调整传代比例。

⭐ 小TIP

✔ 培养人成纤维细胞对于细胞密度有较高的要求，我们建议有条件且计数效率较高的情况下，进行手工计数，以期获得精准的细胞浓度指导接种；在没有精确计数条件的情况下，按照适宜比例传代是更好的方法。

✔ 正常情况下OriCell®人成纤维细胞每代生长时间不超过72h，中途不需要换液。频繁换液会破坏构建起的细胞微环境。

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