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答疑小课堂 | D-荧光素钾盐常见问题解答
常见问题解答
D-萤光素钾盐的纯度是多少？纯度大小对实验有影响吗？
D-萤光素钾盐纯度≥99 %，萤光素纯度越高，相应污染物含量越低，相反则越高，污染物浓度过高将抑制某些酶和细胞中的生物学过程，可能会给实验结果带来偏差，并且可能会对实验动物造成伤害。
D-萤光素钾盐溶解度是多少？其溶液稳定吗？
D-萤光素钾盐溶解度在40 mg/ml以上，其水溶液短期内存放于-80℃，对实验效果没有明显影响。对于部分条件较敏感的实验，为了控制实验中的可变因素，推荐反应液新鲜配制。例如，荧光素酶过低、非最适的反应 条件等都需要高质量的底物才能进行反应。
D-萤光素钾盐的建议用量是多少？
活体成像：以10 μL/g体重确定注射量。每只小鼠接受150 mg D-萤光素钾盐/kg体重（如对于体重为10 g的小鼠，需要注射100 μL以提供1.5 mg D-萤光素钾盐）。
体外成像：一般使用150μg/ml的工作液用于体外细胞成像。
Tips: 注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的发射，需要适当摸索，待萤光信号达到最强稳定平台期，再用相应仪器进行成像分析。
配置好的D-萤光素钾盐溶液如何储存？
工作液现配现用，理想情况下，配置好的储存液可于-20℃储存较短时间。如有必要，萤光素溶液可在-20℃储存长达3周。
Tips: 上述溶液在任何一种温度长时间贮存下都有可能导致信号退化哦！
萤光素（酶）底物的形式有哪些？
分为D-萤光素游离酸、D-萤光素钾盐和D-萤光素钠盐，由于水溶性高，因此钾盐和钠盐通常是最通用的两种检测底物，其中又以钾盐作为活体动物检测使用的主要形式。
如何确定不同模型的峰值信号时间?
生物发光信号的动力学具有组织依赖性。建议每5-10min对动物进行一次成像，最多40 min，为每个新模型创建一个动力学曲线。(常见信号峰值时间点在10-15 min左右，萤光反应发光一般在30 min后衰减，3 h后完全消失。)具体详见逐典D-萤光素钾盐说明书“萤光素动力学曲线制备”。
萤光素底物可以透过血脑屏障吗？
萤光素底物约280 Da，萤光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透细胞膜和血脑屏障。
萤光素酶的表达稳定性如何？
萤光素酶基因能够通过稳定筛选等过程插到细胞染色体内，当细胞进行分裂、转移、分化从而进行持续稳定的表达，萤光素酶的半衰期约为3 h，故只有活细胞才能持续表达萤光素酶。
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