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上海逐典生物科技有限公司

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无惧高盐,更易纯化-逐典耐高盐全能核酸酶

2024-05-22

生物医药的生产过程中通常会使用工程菌或者工程细胞,这些宿主的核酸残留会带来潜在的安全风险,比如连续传代的宿主细胞残留的DNA可能导致人体细胞增殖失控或者病毒残留的核酸整合人体内形成感染等。由于这些风险性的存在,WHO和各国药品监督管理机构都会对宿主核酸残留量和片段长度都有严格的管控,一般将疫苗等生物制品的残留DNA控制在100pg/剂量,特殊情况下最高允许10ng/剂量,残余DNA片段小于200bp 。

全能核酸酶是去除宿主核酸污染有效方案,然而病毒纯化过程中,通常宿主DNA紧密缠绕组蛋白和其他的核蛋白,形成染色质,这种形式主要引起以下问题:

1)染色质的形式可以保护gDNA免于降解

2)染色质与层析介质(阴离子、阳离子交换、HIC 和亲和树脂)的结合能力优于要纯化的产品

3)容易污染层析填料和过滤膜

4)病毒载体的聚集会导致纯化过程中的产量降低,并可能对载体转染效率、生物分布和体内给药后的免疫原性产生有害影响

高盐浓度解决方案

如何在高盐缓冲液中去除核酸污染?

传统的全能核酸酶无法在较高的盐浓度下保持良好的活性,为纯化工艺和成本都带来了挑战。逐典推出的耐高盐全能核酸酶,更高的盐耐受性 (0–500nM NaCl ) 宽泛的PH范围(7.0-11.0)


不同钠离子浓度下酶活力检测图Pannarase在中等Na“浓度条件下活性较高,300mM时仍有36.2%的活性,但浓度超过600mM时酶活性基本完全丧失


不同PH条件下酶活检测图经检测,Pannarase酶活性最适pH为8.0-11.0

逐典Pannarase耐高盐全能核酸酶

Pannarase耐高盐全能核酸酶是一种非特异性核酸内切酶,可以将任何形式的DNA和RNA(线性、环形、超螺旋)降解成3’-单核苷酸及二核苷酸,并可在宽泛的盐浓度和偏碱性pH操作条件下保持高效性。

所谓“工欲善其事,必先利其器”,逐典Pannarase耐高盐全能核酸酶符合GMP要求,专门为高盐状态下样品的HCD去除设计,降低工艺难度,提升生产效率。

逐典Pannarase耐高盐全能核酸酶优势

1,无动物源性,无氨苄青霉素、严格的内毒控制

2,先进的生产工艺,非传统His标签纯化、排除,引入金属离子风险位

3,严格的质控标准,确保单位酶活的、准确性以及批次间稳定性

4,更高的盐耐受性(0-500mMNaCI)、宽泛的pH范围(7.0-11.0)

Pannarase在150 mM Na+浓度条件下酶活性最高


图1.Pannarase耐高盐全能核酸酶耐盐曲线


图2.Pannarase耐高盐全能核酸酶酶切数据