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MatriClone联合VIPS™进行iPSCs的高效单细胞克隆

2022-06-24

诱导多能干细胞（iPSC）具有几乎无限的增殖潜能，并能分化为人体内的任何细胞类型。这就是iPSC的力量，它们已成为治疗几乎所有疾病的主要方法，尤其是与基因编辑技术相结合，并成为未来治疗的工具。

理论上，在0.5个细胞/孔的浓度下，具有30%接种效率的有限稀释法在商业实验室中已被单细胞接种技术取代。VIPS™ （原位验证铺板）是Advanced Instruments (安达望）旗下Solentim产品线之一的高效单细胞接种系统。非常独特的是，该仪器能够在向培养皿中接种后立即捕获单克隆性证据，并在培养基灌注后立即捕获单克隆性证据，即所谓的“双锁”保证。该系统还提供每日全孔成像，以提供克隆生长的进一步证据。

如果不添加培养基添加剂，单个iPSC通常无法生长成克隆。Matrigel是一种广受好评的基质，但它是一种从含有细胞外基质的小鼠肿瘤细胞中提取的凝胶状提取物，并非“不含动物源”，因此具有异种致病性传播和免疫排斥的风险。作为替代方案，我们测试了一种名为MatriClone™的新材料，并将其商业化, 它基于重组蛋白因此不含动物成分。作为对现有工作流程的改进，我们评估了传统的“预涂法”和改进的“溶解法”，“预涂法”是一种耗时且固有可变的方法，而“溶解法”将基质与细胞在培养基中预混可加速工作流程和减少可变性。

结果

与MatriGel相比，在溶液中使用MatriClone可以增加iPSC克隆的生长和融合。

当VIPS与MatriClone联合使用时，细胞生长增加2.5倍。

确保iPSC多能性的维持

在传代和VIPS接种后研究中，iPSCs细胞的Oct4和Nanog均表现出阳性和强染色，表明维持了多能性。通过核型分析/G显带评估（数据有待公布），发现iPSC的稳定性在VIPS/MatriClone工作流程中得以维持。

结论

随着iPSC应用的增长，克隆型iPSC主细胞库的建立将越来越需要标准化。这将适用于研究中的基因编辑细胞系，直至产生iPSC治疗性细胞株。VIPS是一个成熟的商业平台，用于CHO和HEK克隆细胞株的生成和记录。MatriClone是一种新型的“无动物源”基质，旨在支持iPSC的早期生长，在本研究中发现，MatriClone溶解法与VIPS结合使用是一种有效的关键解决方案，可以使iPSC克隆生长更好，并能提供克隆衍生的图像报告。

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