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全能核酸酶你会用吗——核酸酶使用小贴士（三）

2022-12-29

这一篇，我们为大家带来更深入的核酸酶使用技巧！和大家一起探讨如何在实际使用中更好地调整我们的实验方法，让核酸酶发挥最大的作用！本篇主要在尿素变性条件使用、低温环境以及核酸酶灭活与去除等几个问题上做出解答。

典型应用：

新冠灭活疫苗生产过程中宿主DNA的去除

传统疫苗工艺纯化过程中去除宿主核酸

细胞或基因治疗病毒载体制备流程宿主核酸的去除

重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时去除核酸污染

与细胞或细菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白产量

减少存放的外周血单细胞（PBMC）的结块现象）

让我们来看看Pannarse全能核酸酶在使用上更深入的一些小介绍吧！

1. 当蛋白溶解性差需要变性，变性环境对核酸酶有影响吗？

常见的变性条件下一般会使用高浓度尿素。Pannarase核酸酶在尿素浓度6M时，随着时间延长活性会逐渐减少。在7M尿素浓度下，核酸酶15min后出现变性失活，但在酶失活前多数核酸已降解，可通过提高核酸酶浓度补偿高浓度尿素影响。

2. 当反应温度低于37℃时，如何保证核酸酶消化效果？

体系固定的情况下，核酸酶消化效果取决于酶用量、反应温度和反应时间。当反应温度较低时，为避免过多的核酸酶引起的残留问题，更加推荐延长反应时间来保证消化效果。

怎样灭活Pannarase核酸酶？如何去除？

采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制核酸酶活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100mM NaOH，70℃处理30min等。核酸酶可采用阴离子交换柱从目的产物中分离出去。

关于常用反应液和减少用量，你应该知道~~

常用生物缓冲液，如TBS、MOPS（pH6-8）等。如需减少用量，可酌情提高反应温度或延长时间。

以上是我们关于核酸酶使用的更深一步的技巧介绍，后续我们会持续更新为您的实验提供更多参考，敬请关注！