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不可或缺的mRNA研究伴侣——报告基因类型知多少?

2024-01-22

在分子生物学研究范畴中,报告基因(reporter gene)作为常用的基因工具,发挥着不可替代的重要作用。报告基因是一种编码易被检测的蛋白质基因,与目的基因融合表达后,其表达产物可以用来标定目的基因的表达情况。通常通过直接测定报告基因mRNA、蛋白或酶活性来检测报告基因是否在细胞中表达。

在分子生物学研究中,报告基因确实是一个非常重要的工具。报告基因是一种编码易被检测的蛋白质的基因,当它与目的基因融合后,可以通过检测报告基因的表达产物来了解目的基因的表达情况。报告基因的表达产物可以是mRNA、蛋白质或酶等,这些产物可以被特定的检测方法所识别和测量。

作为报告基因,在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件:

① 已被克隆和全序列已测定;

② 表达产物在受体细胞中不存在,且在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;

③ 其表达产物能进行定量测定。

除此之外,理想的报告基因还应做到细胞内其它基因的产物不会干扰报告基因产物的检测,并且产物检测方法应该快速、简便、灵敏度好且重复性好。

随着科学技术的不断发展,报告基因的种类越来越丰富。绿色荧光蛋白基因(GFP)因其易于检测、荧光性质稳定、无细胞毒性、可用于活细胞检测等优点,而被广泛用于生命科学研究。用395nm的紫外线和475nm的蓝光激发,GFP可在508nm处自行发射绿色荧光,无需辅助因子和底物,用常规的荧光显微镜即可定性检测胞内表达情况。增强型绿色荧光蛋白(eGFP)突变体,发射出的荧光强度比野生型GFP大6倍以上,因此,比GFP更适合作为一种报告基因来研究基因表达、调控、细胞分化及蛋白质在生物体内定位和转运等。

除常见的GFP外,红色荧光蛋白在1999年被首次报道,以其能够与GFP共同使用,解决一些GFP单独解决不了的科学问题,同时因其激发和发射波长更长,在细胞内成像时背景低等优点,受到广大科研工作者的青睐。如mCherry是一种红色荧光蛋白的变种,来自于mushroom coral的红色荧光蛋白,被广泛用于生物技术作为示踪剂的红色荧光染料,包括分子的标记和细胞组分的定位等。表现出卓越的荧光亮度及光稳定型,以及更低的细胞毒性。

萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出波长为560nm左右的生物萤光(bioluminescence),是目前体内外检测实验中最常用的萤光素酶,可作为对照研究靶基因在哺乳动物细胞中的翻译效率,细胞活力和体内成像测定。

逐典萤光素酶报告基因

针对报告基因检测不同的侧重需求,逐典推出了3种检测系统。

逐典萤光素酶报告基因特点:

1. 检测灵敏度高,信号稳定性好

HEK293-NFK B-LUC细胞加入梯度稀释的TNF 在37C、5%CO条件下刺激6小时后,分别用增强型、超敏型、稳定型检测试剂进行信号检测。

2. 操作方便

仅需将底物和萤光素酶检测缓冲液混合后直接加入到细胞即可。

3. 稳定性好

同时在10次反复冻融实验中,逐典全系列报告基因检测试剂盒显示出较强的稳定性。