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如何养好贴壁细胞，请速查收这份攻略！
贴壁细胞培养攻略
一，贴壁细胞的分类及形态
贴壁细胞一般分为皮细胞型，成纤维细胞型，游走细胞型和多型细胞型。
在显微镜下观察时，贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形或其它形态，而且晃动培养液时，细胞不动。培养细胞在未贴附于底物之前一般均似球体样；当与底物贴附后，细胞将逐渐伸展而形成一定的形态，呈成纤维细胞样或上皮细胞样等。
二，实验材料与仪器
实验材料：细胞、PBS 或 DPBS、0.25% (w/v) Trypsin-EDTA、75% 乙醇、培养基、100X 双抗（链霉素-青霉素）、胎牛血清、细胞冻存液。
实验仪器及耗材：培养皿或培养瓶、移液枪、离心管、记号笔、封口膜、冻存管、程序降温冻存盒、液氮罐、离心机、37℃ 恒温培养箱（5% 二氧化碳浓度）、倒置相差显微镜、冰箱、无菌细胞操作台。
三，实验步骤
1. 试剂准备
DMEM完全培养基（10% 胎牛血清）：44.5 mL DMEM +5 mL 胎牛血清+500 μL 100X 双抗，摇匀，4 ℃ 冷藏保存，使用前于 37 ℃ 恒温水浴锅中预热 15 分钟。
PBS、完全培养基、根据细胞特性选择合适的解离液或机械吹打消化细胞、胰蛋白酶解离剂 0.25% (w/v) Trypsin-EDTA于 4℃ 冷藏保存，使用前于 37 ℃ 恒温水浴中锅预热 15 分钟。
2. 细胞复苏
1) 超净工作台使用前紫外线照射 30 分钟。使用前，后用 75% 酒精擦拭台面。保持台面干净整洁。使用时一定打开通风。
2) 将冻存细胞从 -80 度冰箱或液氮罐中取出，立即放入（2 分钟内）37 ℃ 恒温水浴中预热水浴锅中（或在手心中反复摩擦），不停晃动以化冻。
3) 立刻将化冻的细胞液转移进装有 3 mL DMEM完全培养基的 5 mL离心管中并吸打均匀。注意液体不要留在瓶口或瓶盖上，避免增加污染的可能。
4) 复苏细胞时，离心机提前降温至 4℃，以 1000 rpm 的转速将细胞悬液离心 5 分钟并弃上清。
5) 用 3 mL DMEM 完全培养基重悬细胞，并转移进 6 cm 细胞培养皿中，放入细胞培养箱中。
6) 在显微镜下观察复苏细胞的状态，并及时更换DMEM完全培养基。
7) 当细胞密度占显微镜视野 80%～90% 时，应进行细胞传代。
3. 贴壁细胞传代（以 6 cm 细胞培养皿为例）
1) 弃置原培养皿中的培养基，从培养皿边缘加入 2 mL 预热的 PBS 平衡盐溶液润洗细胞（注意不要直接冲到细胞表面）。
2) 沿培养基侧壁加入1 mL 预热的 0.25% (w/v) Trypsin-EDTA，使胰蛋白酶完全覆盖细胞表面。于细胞培养箱中孵育，孵育时间根据细胞的特点而定。
3) 向培养皿中加入1 mL 完全培养基中和 Trypsin 的作用，并轻轻吸打细胞表层数次。将细胞悬液转移到 5 mL 离心管中，在室温下以 1000 rpm 的转速将细胞悬液离心 3 分钟。
4) 小心弃去离心管中的上清液，使用 1mL 完全培养基轻轻重悬细胞沉淀，使其完全被吹打为单个细胞状态，尽量减少泡沫的产生。
5) 进行细胞计数后以 1:3（1:3～1:6均可）的比例进行细胞传代。
6) 取三只新 6 cm 细胞培养皿，每只培养皿中加入 3 mL 完全培养基，将细胞悬液平均分配至三只培养皿中，盖上盖子后，按照画十字的操作，将细胞摇匀。
7) 细胞培养皿放入细胞培养箱中，继续培养，每天观察细胞状态并及时更换培养液。
逐典TrypLUS消化液是一种胰蛋白酶类似物（Trypsin Like Enzyme），是一种通过生物工程制备的非动物源性重组蛋白酶，与胰蛋白酶有相似的解离动力学，稳定性更高，纯度更好，消化更温和，细胞毒性更低。目前主要应用于细胞培养中，可以在赖氨酸和精氨酸的C末端切割肽键，可以替代猪或牛胰蛋白酶（Trypsin）对贴壁细胞的消化解离。生物制药中，GMP级别的TrypLUS能够为疫苗生产、病毒载体生产提供高质量和高性价比的贴壁细胞消化解决方案。
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1. DMF备案
2. 非动物来源
3. 室温贮存，无需胰酶抑制剂，稀释即可终止
4. 消化温和，消化后细胞活性高
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逐典TrypLUS消化液应用案例
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