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萤光素酶技术在小分子药物筛选研究中的应用
一,药物研发关键点
二,理想的药物靶标筛选模型
1)高灵敏度
2)宽的线性范围
3)稳定且可重复
4)操作简单
5)可进行高通量筛选
三,高灵敏度发光检测技术:萤光素酶检测技术
荧光与化学发光的比较
由于荧光需要光激发后才能发出光,因此必须有一种方法可以区分输入光和输出光,需要滤光片将某些波长的光过滤掉,只让发射光的波长通过。然而,没有任何滤光片是完美的,总有一定量的激发光会透过滤光片,因此就增加了背景噪声。
生物化学发光过程不需要外部光源,均从发光过程中产生。这意味着没有背景光。因此,产生的光与测得的光之间存在很强的线性相关性,其线性范围远大于荧光:发光过程为7~8个数量级,而荧光过程仅为3~4个数量级。
萤光素酶:是自然界中能够产生生物发光的酶的统称。
1. 具有酶活性(信号放大能力)
2. 蛋白小
3. 没有内源性表达,背景低
4. 易于定量
5. 高灵敏度、线性范围宽
6. 反应迅速
7. 可实现双萤光素酶报告基因检测
四,萤光素酶技术应用于药物靶标筛选
基于萤光素酶的应用,开发药物靶标筛选产品:
1)检测萤光素酶水平的变化;
2)检测ATP,例如:
• RealTime-GloTM Extracellular ATP 检测
• GTPase-GloTM检测
• ENLITEN® ATP 检测
• 激酶活性检测
• 细胞/细菌活力检测
• cAMP
• Pgp糖蛋白检测
3)检测修饰的萤光素底物,例如:
• Caspase 3/7活性检测
逐典萤光素酶报告基因检测试剂盒
逐典萤光素酶报告基因检测试剂盒旨在准确、灵敏、高效地测定萤火虫萤光素酶活性,应用高通量药物筛选、药物活性检测、大规模启动子功能测定、信号通路等研究。
目前,最常使用的萤光素酶主要包括 Firefly luciferase 和 Renilla luciferase,针对报告基因检测不同的侧重需求,逐典推出了3种检测系统。