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上海逐典生物科技有限公司

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借助假病毒颗粒和萤光素酶报告基因定量检测病毒侵入

2024-03-05

一,什么是病毒

具有感染性,能够导致疾病的微小的非细胞型生物。


各种形态和大小的病毒

虽然形态不一样,但是大部分的病毒在分子水平上的组成上有一定的相似性

二,病毒颗粒的共有元件:

1. 由DNA或RNA组成的基因组(遗传物质)

2. 包裹着病毒基因组的蛋白质衣壳(capsid)

3. 某些病毒具有脂质包膜(envelope)

4. 介导进入宿主细胞的蛋白

三,病毒的生命周期


病毒的侵入阶段(virus entry)是开发抗病毒药物和疫苗的重要靶点

1. 粘附(Attachment)

2. 穿入(Penetration)

3. 脱衣壳(Uncoating)

4. 生物合成(Biosynthesis)

5. 组装(Assembly)

6. 释放(Release)

四,报告基因检测已广泛应用于病毒研究中

应用报告基因技术的好处:

• 可以消除或减少操作传染性病毒的需要

• 可以在更低级别的生物安全实验室中进行研究

• 可以加速高风险病毒的研究

五,借助假病毒颗粒和萤光素酶报告基因定量检测病毒侵入

假病毒颗粒( Pseudotyped Viral Particles,PVPs)

• 病毒衣壳蛋白或包膜蛋白包裹携带有报告基因的异源核酸

• 不具备复制形成病毒全部核酸序列的能力,仅有一轮感染能力

• 可更安全的用于中和抗体及抗病毒药物检测

• 利用表达载体和包装质粒共转染细胞,在细胞内组装形成

我们可以通过收集培养基上清,裂解细胞获得假病毒颗粒,获得假病毒颗粒后,用它来感染带有相应受体的细胞,72h后经过粘附,穿入和脱衣壳,病毒携带的报告基因会在细胞内表达,通过检测报告基因的表达水平,就可以判断病毒侵入的水平。 这里的报告基因是萤光素酶,萤光素酶更适用于定量检测的报告基因。当我们要研究中和抗体实验的时候可以在病毒最初的粘附阶段进行相应的处理,检测其对病毒侵入是否有抑制作用。



假病毒颗粒,其衣壳蛋白或包膜蛋白会包裹携带有报告基因的异源核酸,并且这种假病毒颗粒不具备复制形成病毒全部核酸序列的能力,仅有一轮感染能力。所以可以更安全的用于中和抗体及抗病毒药物检测。

逐典萤光素酶报告基因


针对报告基因检测不同的侧重需求,逐典推出了3种检测系统。


逐典萤光素酶报告基因特点:

1. 检测灵敏度高,信号稳定性好

HEK293-NFK B-LUC细胞加入梯度稀释的TNF 在37C、5%CO条件下刺激6小时后,分别用增强型、超敏型、稳定型检测试剂进行信号检测。


2. 操作方便

仅需将底物和萤光素酶检测缓冲液混合后直接加入到细胞即可。


3. 稳定性好

同时在10次反复冻融实验中,逐典全系列报告基因检测试剂盒显示出较强的稳定性。