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应用分享 | TPO用途之iPSC体外分化“人造血小板

2024-03-11

新品试用

不容错过的福利


Chaselection逐典现推出血小板生成素(TPO)、重组人干细胞因子(SCF)、酪氨酸蛋白激酶受体(FLT3)组合加油包,无动物源,非标签纯化,高纯度、高活性、高安全性,支持造血干细胞,iPSC等细胞的体外培养与定向分化。

近年来,关于造血干细胞相关研究成为行业研究的热点。18年在顶级生命科学期刊《Cell》上发表了日本京都大学细胞研究与应用中心Ito等人的研究“湍流激活血小板的生物发生使其体外制备达到临床应用规模”(Turbulence Activates Platelet Biogenesis to Enable Clinical Scale Ex Vivo Production)[1],文章一经发表就引起业界的高度关注。研究表明人造血小板,准确地说,是使用诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cell,iPSC)制备血小板的“生产效率”初步达到了临床实际应用的水平,人造血小板开始从“实验台来到病床边”。

iPSC是体外血小板生成的来源细胞

iPSC具有多向分化和自我更新的能力,能在体外无限增殖。与胚胎干细胞相比,iPSC来源于体细胞,通过重编程来重获干性,来源不受限,无伦理争议[2]。

图1.诱导多能干细胞可以在体外被间接扩增,并被诱导分化为任何类型的细胞[3]。


通常,再生障碍性贫血(即“再障”)或其他疾病造成的严重血小板减少,需要进行血小板输血。采用血小板进行治疗的一般过程:先采集患者细胞,制备成iPSC细胞。接着,再把iPSC细胞制备成造血祖细胞,再分化成巨核细胞,并冷冻作为主细胞库,巨核细胞可以长时间储存。最后,由巨核细胞制备血小板用于相应疾病的治疗。

在培养造血干细胞或促进iPSC的定向分化过程中需要使用细胞因子进行调节。细胞周期由4个期组成:G1期、S期(合成期)、G2期和M期(有丝分裂期)。HSC 是处于 G0 期静止状态的细胞。HSC的负向调控因子(TGF-β、MIP-1α、p38)主要在细胞周期关卡(checkpoint)进行调节,抑制细胞进入G0期。而一些 HSC 正向调控因子(SCF、FL3、TPO)可以使细胞走出G0期,开始扩增,因而在HSC的培养过程中,细胞因子的选择至关重要。

图2 细胞因子调节 HSC 的细胞周期[4]

逐典血小板生成素TPO

逐典血小板生成素(TPO)分子量约19 kDa,分子序列和野生型同源性大于98%,采用E.coli原核表达系统,不含动物源成分,通过非标签纯化方式,大幅度降低外源金属离子引入风险,其纯度>95%,内毒素<0. 1 EU/μg,在保证安全性的同时大大提高了产品的特异性,全方位满足您的需求。

01产品特点

原核表达系统,无动物源成分

活性高,比活≥1×107 units/mg

非标签纯化,外源金属离子引入风险低

02产品数据

1.电泳(SDS-PAGE)

采用SDS-PAGE分离,显示蛋白分子量约19kDa,且未见杂蛋白,与天然蛋白类似

2.活性(Bioactivity)-Bioactivity CELL BASE

通过对人Mo7e(巨细胞白血-病细胞株)细胞进行增殖剂量依赖性刺激实验,结果表明ED50≤1.0ng/ml,对应的比活性≥1×107单位/mg。

参考文献

[1] Ito Y, Nakamura S, Sugimoto N, Shigemori T, Kato Y, Ohno M, Sakuma S, Ito K, Kumon H, Hirose H, Okamoto H, Nogawa M, Iwasaki M, Kihara S, Fujio K, Matsumoto T, Higashi N, Hashimoto K, Sawaguchi A, Harimoto KI, Nakagawa M, Yamamoto T, Handa M, Watanabe N, Nishi E, Arai F, Nishimura S, Eto K. Turbulence Activates Platelet Biogenesis to Enable Clinical Scale Ex Vivo Production. Cell. 2018 Jul 26;174(3):636-648.e18.

[2] 岳伟,顾海慧.诱导多能干细胞体外分化血小板技术的研究进展[J].中国输血杂志,2023,36(09):851-856.

[3] Sugimoto N, Eto K. Generation and manipulation of human iPSC-derived platelets. Cell Mol Life Sci. 2021 Apr;78(7):3385-3401.

[4] 田菁,蒋永平.细胞因子在人造血干细胞体外扩增培养中的作用研究进展[J].生物医学工程与临床,2013,17(05):507-512.