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掌握这三点，胰蛋白酶区分不再是难点！
胰蛋白酶，作为一种重要的消化酶，在生物体的消化过程中起着关键作用。根据其来源和生产方式的不同，胰蛋白酶大致可以分为两大类：动物源性胰蛋白酶和非动物源性胰蛋白酶。传统使用的动物源性的胰蛋白酶，普遍发现于脊椎动物消化系统，直接提取自牛或猪的胰腺组织；非动物源性胰蛋白酶是利用基因重组技术生产的，也被称为重组胰蛋白酶。通过基因重组技术，人们可以在特定的生物体（如细菌或酵母）中表达胰蛋白酶的基因，从而大量生产胰蛋白酶。
一，应用区别
胰蛋白酶
理化性质
胰蛋白酶是从牛、猪、羊的胰脏提取，通过多重结晶方式纯化，并进一步采取层析及超滤技术制备而得。该酶易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有机溶剂。在pH1.8时，酶短时间煮沸几乎不失活，在碱溶液中加热则会变性沉淀。Ca”对酶有保护和激活作用，胰蛋白酶的等电点为pH10.1。胰蛋白酶作为肽链内切酶，对精氨酸和赖氨酸肽链具有选择性水解作用。早期的胰蛋白酶在生物制药领域的主要应用是胰岛素的生产，很快也在其他细胞培养领域应用起来。动物胰酶普遍用于血清培养，不同细胞加入的酶浓度不一样。
应用范围
胰岛素、灭活疫苗生产；组织细胞分离及培养；临床外科使用；食品行业加工助剂
重组胰蛋白酶
理化性质
重组胰蛋白酶是一种使用基因工程技术生产的酶，具有稳定性好、纯度高、无动物来源的优点。市场主流的重组胰蛋白酶是利用DNA重组技术在大肠杆菌或酵母中表达的重组猪胰蛋白酶，其氨基酸序列与猪胰蛋白酶完全一致，具有与天然胰蛋白酶相同的活性和特异性。其由223个氨基酸构成，含有6对二硫键。该酶包含两种胰蛋白酶活性形式：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF和TLCK等、金属离子螯合剂如EDTA等的抑制。重组胰酶用于无血清培养，同胰蛋白酶一样，不同细胞加入的酶浓度不一样。
应用范围
疫苗和重组胰岛素生产；细胞分析的组织样本制备；免疫细胞治疗；生物药物生产；蛋白质序列、结构及组学研究
二，质量要求区别
同时，药典级别的重组胰蛋白酶要求微生物的菌落总数不超过100cfu/mL，宿主蛋白质残留量不超过0.01%，外源性DNA残留量不超过10ng/mg。由上表可以看出，相比传统动物源提取的胰蛋白酶，重组胰蛋白酶在活性、纯度以及无动物源性等方面优势更为明显，更符合生物制药行业发展趋势。在国家政策层面上，2019年9月国家药监局发布的《疫苗上市后生产工艺变更研究技术指导原则》 (征求意见稿) 指出，在疫苗生产过程中，鼓励企业进行无动物源原辅料的变更，应尽可能避免使用人源或动物源性原材料。2020年版《中国药典》增加了重组胰蛋白酶标准，推动我国非动物源性生物药物的研发，因此重组胰蛋白酶已逐渐成为更高标准、更高要求的生物制药首选。翌圣生物在重组胰蛋白酶领域不断创新，不仅推出满足2020版中国药典要求的重组胰蛋白酶，最新推出的重组胰蛋白酶（质谱级）活性更高，优于进口同类产品，其中β-Trypsin的HPLC含量可达80%以上（高于2020版中国药典标准≥70%），储存稳定性高，蛋白质组学酶解漏切率比进口产品低50%。
三，细胞分离及基因表达水平区别
Maarof Manira等人研究了不同胰酶对皮肤细胞培养的影响。在这项研究中，全层人皮肤经过胶原酶消化后释放成纤维细胞，分别使用胰蛋白酶EDTA溶液（TE）和重组胰蛋白酶溶液（TS）处理细胞，发现在细胞的培养扩增过程中，用TE或TS处理的人角质形成细胞和成纤维细胞的总细胞产量相当（见图1）；通过定量RT- PCR和免疫细胞化学方法（ICC）分析TE和TS对I型胶原（Col-I）、III型胶原（Col-III）、细胞角蛋白10（CK10）和细胞角蛋白14（CK14）的基因和蛋白表达水平影响，发现与TE相比，TS除Col-III外的皮肤特异性基因表达更高，蛋白表达水平相似（见图2,4）。研究数据反馈，重组胰蛋白酶（TS）表现出更温和的消化效果，能够保持高细胞活力和细胞产量。
四，逐典重组胰蛋白酶是一款满足药典要求的GMP级非动物源胰蛋白酶
Trypelectase 重组胰蛋白酶是逐典生物专门为疫苗、病毒载体生产设计，具有高效、非动物源和高质量标准的特点。该胰蛋白酶氨基酸序列与猪胰腺来源的胰蛋白酶一致，由大肠杆菌(E.col) 重组表达生产。在GMP级别环境中生产的重组胰蛋白酶能高效消化贴壁细胞且不造成伤害，产品质量满足药典要求。
逐典重组胰蛋白酶特点
1.GMP级生产环境、符合药典标准
2.重组生产、不含杂酶
3.批量生产、质量稳定
4.高纯度、高比活
5.非动物源原料
逐典重组胰蛋白酶应用场景
组织块的消化解离和原代细胞的获取、贴壁细胞的传代消化和收获、微载体方法培养的细胞消化和收获。
实验数据
CT26.WT 和 HEK293FT 细胞消化实验
CT26WT和HEK293FT在经Trypelectase重组胰酶消化3min后解离效果较好，细胞活率显示对细胞伤害较小，不会影响细胞传代。
Trypelectase重组猪胰酶对细胞消化过程及传代24h细胞贴壁图
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