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细胞培养必备：重组胰蛋白酶，优势何在？
物源性胰蛋白酶，如从牛、猪的胰脏中提取的胰蛋白酶，在细胞培养中起着关键作用。它主要通过降解细胞外基质以及断开细胞间连接，帮助实现细胞的分离。这对于各种生物技术实验，如细胞流式检测、外泌体提取、细胞转移和透析等都具有重要意义。然而，使用动物源性胰蛋白酶也存在一些潜在的问题。
一,安全性
可能的病毒污染：目前，使用猪胰蛋白酶的疫苗生产企业要按照2010版药典规定检测可能的病毒含量，如猪细小病毒。
可能细菌、真菌、支原体污染：将影响细胞的生长和产品质量。
重组胰蛋白酶是基因工程重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。
二,纯度
杂质：因为历史的原因，用于组织培养的胰蛋白酶活性定为1:250，其实，1:250的胰蛋白酶中90%以上为杂质。
杂质的成分主要为来源于胰腺的脂类、蛋白和核酸等，在胰蛋白酶处理细胞的过程中，可能会透过细胞膜，可能对细胞的生长形成影响，特别是在科研中，用细胞来鉴定一些活性物质的作用时，可能会影响真实效果的检测。
重组胰蛋白酶纯度高，比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。
三,消化效果与活性相关
活性：虽然用于组织培养的胰蛋白酶活性定为1:250，实际上，其活性却不固定，有的可能不到1:250，有的却可以高达1:1000--1:2000。因此，如果都用常规的配制方法如：0.25%来配制的话，将会使胰蛋白酶消化液的活性相差5倍甚至10倍。
弊端：胰蛋白酶的活性直接影响细胞消化结果和消化后细胞的生长。
活性过低：细胞消化不好，细胞消化所需时间长；
活性过高：细胞消化太快（比如：不到30s），易于消化过度，其危害是：轻则影响细胞生长，重则细胞死亡。消化后转接细胞密度减小，规定时间内生长不起来。
重组胰蛋白酶可按照活性单位投料，完全避免使用过程中过多或者过少投料。
逐典重组胰蛋白酶
Trypelectase 重组胰蛋白酶是逐典生物专门为疫苗、病毒载体生产设计，具有高效、非动物源和高质量标准的特点。该胰蛋白酶氨基酸序列与猪胰腺来源的胰蛋白酶一致，由大肠杆菌(E.col) 重组表达生产。在GMP级别环境中生产的重组胰蛋白酶能高效消化贴壁细胞且不造成伤害，产品质量满足药典要求。
逐典重组胰蛋白酶特点
1.GMP级生产环境、符合药典标准
2.重组生产、不含杂酶
3.批量生产、质量稳定
4.高纯度、高比活
5.非动物源原料
逐典重组胰蛋白酶应用场景
组织块的消化解离和原代细胞的获取、贴壁细胞的传代消化和收获、微载体方法培养的细胞消化和收获。
实验数据
CT26.WT 和 HEK293FT 细胞消化实验
CT26WT和HEK293FT在经Trypelectase重组胰酶消化3min后解离效果较好，细胞活率显示对细胞伤害较小，不会影响细胞传代。
Trypelectase重组猪胰酶对细胞消化过程及传代24h细胞贴壁图
逐典重组胰蛋白酶常见问题
Q：逐典重组胰蛋白酶配置是否需要过滤?
A：需要使用0.22μm滤膜除菌过滤，这个在母液配置和工作液（即稀释后）的配置中都是需要的。
Q：逐典重组胰酶产品是否是无菌产品？
A：不是无菌产品，产品COA中是微生物限度标准为100CFU，所以在配置使用前需要进行无菌过滤。
Q：逐典重组胰蛋白酶的配置有哪些环节？分几步？
A：重组胰酶从干粉到能直接使用的工作液需要两大环节。第一步：需要配置成低PH的母液，除菌过滤；第二步：再进行中性缓冲液稀释，过滤除菌后就能直接使用了。
Q：逐典重组胰酶的主要优点是那些？
A：非动物来源、GMP环境生产、高酶活、高稳定性。
Q：逐典重组胰酶的建议使用浓度是多少？
A：配置母液的浓度是10 mg/ml，配置工作液浓度是0.5 mg/ml。
Q：逐典重组胰酶产品如何保存？干粉？母液？工作液？
A：一般来说，我们的干粉产品 -20℃保存 2年没有问题， 配成母液-20℃保存 1年没有问题，工作液的话-20℃保存 1-3个月没有问题，临时用放在4℃可保存一周内，但还是建议客户现用现配。
Q：消化细胞的胰酶是不是浓度越高越好？
A：不是的，一般来说消化细胞会有一个最佳胰酶浓度，达到最适浓度后浓度升高会伤害细胞。
Q: 细胞消化时间长是不是意味着胰酶产品性能不行？
A: 一般的细胞消化时间3-5min都是很正常的，难消化的细胞10-15min也是存在的。 细胞消化时间长短不能完全决定产品性能，产品的比活、活性、级别、生产技术、以及质量标准等因素都是评判产品性能的条件。
Q: 如何控制胰酶消化时间？
A: 不同细胞对消化液的敏感性不同，胰酶消化的时间也会有差异。胰酶消化时间与胰酶的浓度，是否含EDTA，胰酶的储存时间，胰酶的储存温度，是否反复冻融，消化加入的胰酶体积，消化温度及细胞的密度有关。
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