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新冠贝塔Spkie假病毒

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详细描述:
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) (B.1.351) Spike 假病毒简介

新冠病毒Beta变异株 (B.1.351) 2020年12月在南非最早被发现。其Spike蛋白上主要存在8个突变,包括RBD的3个重要突变:K471N、E484K和N501Y,其中E484K和N501Y位于受体结合区,是与人ACE2受体结合的主要位点。研究团队发现新冠mRNA疫苗和重组蛋白疫苗对Beta变异株的防护能力均有所下降。
使用HIV-1(人类免疫缺陷I 型病毒)为基础载体转染293T细胞后,包装成SARS-CoV-2 (2019-nCoV) (B.1.351) Spike 假病毒,表面表达SARS-CoV-2 (2019-nCoV) (B.1.351) Spike Pseudovirus蛋白,并携带有荧光素酶报告基因,可用于侵染过表达ACE2的细胞,荧光素酶在细胞内表达。此假病毒无自主复制能力,具有安全性高、可操作性强等特点。
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) (B.1.351) Spike 假病毒序列:
YP_009724390.1(del(L242,A243,L244),D80A,R246I,K417N,E484K,N501Y,D614G,A701V)


SARS-CoV-2 (2019-nCoV) (B.1.351) Spike 假病毒检测参数

(1)信号值:假病毒感染细胞(293T-ACE2)后48-72小时,Luciferase发光值最高可达106RLU (Relative Light Unit)以上。
(2)滴度:10^3.97 TCID50/mL。


SARS-CoV-2 (2019-nCoV) (B.1.351) Spike 假病毒使用指导

(1)中和检测:50µL假病毒与50 µL抗体/血清37℃共孵育1小时后,侵染过表达ACE2的细胞株,48-72小时后使用化学发光仪检测Luciferase发光值,根据Luciferase发光值计算中和抑制率。

参考试验方案:ACE2过表达293T细胞系(293T-ACE2,货号OEC001),96孔板铺板细胞密度3-5×104 /孔,假病毒用量50 -100 µL,可根据预实验结果稀释2-3倍使用。

(2)标准品:使用Triton X-100(终浓度0.5%)裂解假病毒后,可作为标准品用于ELISA等检测。
(3)稀释缓冲液:检测细胞所用的培养基(例如DMEM培养基等)
(4)保存条件:-80℃,自收到之日起质保期1年。
(5)注意事项:建议在BSL-2级实验室使用;经验证此假病毒更适用于侵染过表达ACE2的细胞株,而在非过表达ACE2的细胞株上效果不理想(例如Vero E6、293T等)。


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