进入官网查阅产品详细信息
详细描述：
聚凝胺是一种阳离子聚合物，可以大大提高逆转录病毒或慢病毒感染哺乳动物细胞的效率。它起到中和病毒体与细胞表面之间电荷排斥的作用，从而提高感染效率。逆转录病毒感染的效率在某些细胞中显著提高了 100 到 1,000 倍，这是因为在感染过程中加入了聚凝胺。含有 DMSO 的聚凝胺储液还用于介导 DNA 转移到多种细胞类型中，例如 CHO、鸡胚成纤维细胞、NINH-3T3 和髓样细胞。 方法：逆转录病毒感染 重组逆转录病毒储液是通过将 5ml 生长培养基（含 5％ 血清）添加接近汇合的转染的逆转录病毒包装细胞单层细胞的 100mm 平板中来制备的。24 小时后，去除培养基，并通过 0.45um 过滤器过滤。 将要感染该重组逆转录病毒储液的细胞以每个 100mm 平板 500,000 个细胞的量接种在 10ml 完全培养基中。 24 小时后，去除细胞的生长培养基。用 2ml 的病毒上清液（或将病毒储液稀释至 2ml）感染细胞，每毫升添加 5ug 至 10ug 的聚凝胺（终于浓度），在 37°C 下孵育细胞 3 到 6 小时。 加入 8 ml 完全培养基。感染三天后，将细胞按 1：5 的比例分进选择培养基。 参考文献： Toyoshima, K. and Vogt, P.K., 1969.Virology.38:414-426 Coelen, J.R., Jose, D.G. and May, J.T.1983.Arch.Virol.75:307-311 方法：转染 将细胞铺在完全生长培养基中，约有 50％ 汇合。 铺板后 18 至 24 小时，立即使用以下方法制备 DNA-培养基-聚凝胺溶液： 注意：必须按照正确的顺序添加每个组件。 1：完全生长培养基（60mm 平板，2ml； 100mm 平板，3ml），加热至 37°C。 2：质粒 DNA，10ng 至 10ug。轻轻混合。 3：聚凝胺的终于浓度为每毫升 5ug 至 10ug。轻轻混合 从平板中去除培养基，并将 DNA-培养基-聚凝胺溶液添加到细胞中。让细胞在 37°C 下孵育 6 到 20 小时，前 6 个小时大约每 1.5 个小时轻轻摇动一次。 去除 DNA-培养基-聚凝胺溶液，并用 DMSO 储液轻轻覆盖细胞（在 1X HBSS 中的 15％ DMSO：专门培养基（货号 S-051-D）每个 60 mm 平板 3 ml，每个 100 mm 平板 4 ml。手动摇动培养皿 10 秒钟，使溶液均匀分布，然后将细胞置于 37°C 下温育 4 分钟。 立即去除 DMSO 储液，并用完全生长培养基轻轻冲洗细胞两次，每个 60 mm 培养皿每次洗涤用 5 ml，每个 100 mm 培养皿每次洗涤用 10 ml 将完全生长培养基添加到细胞中。 若要获得稳定的转化子，则去除生长培养基，并将细胞按 1：5 比例分进选择培养基。 若要瞬时表达，去除生长培养基并添加新鲜的生长培养基。24 至 72 小时后收获细胞和/或培养基。 参考文献： Chaney, W.G. et al., 1986.Somatic Cell and Molecular Genetics.Vol. 12, No. 23, 237-244. Aubin, R.J. et al. 1988.Somatic Cell and Molecular Genetics.Vol. 14, No. 2, 155-167. Chisholm, O. et al., 1998.Nucleic Acids Research.Vol. 16, No. 5, 2352 提供的试剂通过 0.2um 膜过滤并用无菌 H2O 水化。
粤公网安备 44010602000473号
粤ICP备09063491号
营业执照
