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详细描述:
Pefabloc SC用于在制备蛋白质纯化过程中抑制蛋白酶的破坏作用。由于其对真核细胞的低毒性,它可以在转化细胞的发酵过程中用于重组蛋白的生产,在该生成过程中蛋白的水解消化可能会降低所需产物的产量。Pefabloc SC可用于在琼脂糖块中制备染色体DNA过程中完全灭活蛋白酶K.为此,细胞被包埋在琼脂糖中并用蛋白酶K消化以降解所有蛋白质。在加入特异性限制性内切核酸酶之前,通过将琼脂糖块置于1mM至5mM Pefabloc SC中(溶于10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH7),在+37℃下孵育2小时或过夜,从而使蛋白酶K失活。与PMSF相比,Pefabloc SC是血清或血浆中凝血酶活性的优异阻断剂。在这些生物体液中,PMSF能以可逆的方式与白蛋白相互作用,从而降低游离白蛋白的浓度并导致凝血酶失活延迟。然而,Pefabloc SC不会与血清白蛋白反应,并且在类似条件下表现出高三倍的凝血酶灭活能力。Pefabloc SC可用于活细胞。使用Pefabloc SC灭活蛋白酶K,例如,在脉冲场凝胶电泳(PFGE)过程中。在该电泳技术中,分离基因组DNA需要蛋白酶K对细胞组分进行降解,然而这种高弹性蛋白酶难以被灭活。Pefabloc SC可抑制蛋白酶K,并保护用于进一步DNA分析的限制酶的稳定性。