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详细描述:
T4 DNA 聚合酶用于标记 3′-DNA 的末端。通过置换反应实现广泛标记,其中 3′-酶的核酸外切酶活性首先消化 dsDNA,产生具有凹陷 3′-终点。在随后加入标记的 dNTP 时,T4 DNA 聚合酶的聚合酶活性再延长 3′沿模板长度结束。来自 大肠杆菌 的核酸外切酶 III 可用于生成部分单链 dsDNA 用于随后的聚合反应。标记为高比活度的分子主要用作杂交探针。与缺口平移法制备的探针相比,它们有两个优点:缺乏人工发夹结构,用合适的限制性内切酶切割很容易将它们转化为链特异性探针。结合 T4 基因 32 蛋白,T4 DNA 聚合酶用于定点突变实验中的补缺。