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详细描述:
细胞介绍
注射放射性同位素磷(32P)诱导产生的可移植性大鼠骨肉瘤克隆建立了UMR-106细胞株。细胞对PTH,前列腺素及破骨甾体有响应。对PTH的响应度,UMR-106比相关细胞株UMR-108(ATCC CRL-1663)要高。蛋白激酶C的活化抑制ATP诱导的胞内钙水平的升高。
细胞特性
1)来源:大鼠,骨肉瘤
2)形态:上皮细胞样,贴壁生长
3)含量:>1x106 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T75瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
使用T25瓶充液发送活细胞。收到细胞后,请先在显微镜下检查细胞生长状态,并将T25瓶置于培养箱约6h或过夜后,再次检查细胞状态。若状态良好,可按照以下细胞培养步骤进行细胞后续处理操作。若发现可疑污染物,请及时与我们取得联系。
细胞用途:
仅供科研使用。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM-H培养基(DMEM-H,GIBCO,货号12800017,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。(DMEM液体培养基:GIBCO,11995-065)。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。