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厦门逸漠生物科技有限公司

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LLC-PK1猪肾细胞

IMMOCELL

IM-C025

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详细描述:
细胞介绍
该细胞源自3~4周龄的Hampshire猪肾组织,可产生纤溶酶原激活物。
 
细胞特性
1) 来源:猪肾
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T75瓶或者1mL冻存管包装
 
运输和保存
(1)使用T25瓶充液发送活细胞。
(2)收到细胞后,请先在显微镜下检查细胞生长状态,并将T25瓶置于培养箱约6h或过夜后,再次检查细胞状态。若状态良好,可按照以下细胞培养步骤进行细胞后续处理操作。若发现可疑污染物,请及时与我们取得联系。
 
细胞用途:仅供科研使用。
                       
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

1x106cells/T25或1mL冻存管
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