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mRNA基因递送解决方案
Vectorbuilder
mRNA基因递送解决方案
云舟生物提供一站式的mRNA疗法开发解决方案,如疫苗、基因编辑、CAR受体以及细胞或胚胎中的重组蛋白表达服务。我们的团队拥有丰富的mRNA设计与生产经验,可以帮助研究者完成体外转录载体设计、载体克隆、体外mRNA合成、mRNA-LNP复合物制备、以及体外/体内的mRNA功能性测试,以加速mRNA疫苗与相关基因疗法的药物研发。
点看查看官网详情:mRNA基因递送解决方案-云舟生物 (vectorbuilder.cn)
咨询电话:18127926965
体外转录(IVT)载体设计和克隆
我们使用的IVT载体骨架经过优化,具有很高的体外转录效率(图1)。
可采用多种经过内部性能验证的5'、3' UTR 和poly(A)尾巴(110 nt)。
快速生产可进行下游线性化、加帽、多聚腺苷酸化的定制的 IVT 载体。
提供基于文献报道、计算机预测以及实验验证等多种密码子优化服务。
体外mRNA合成与脂质纳米粒(LNP)封装
使用T7 RNA聚合酶合成长达10,000 nt的传统或者自扩增mRNA,产量覆盖ug到mg级别。
5' Cap 1加帽、3' poly(A)加尾(110 nt,基于模板序列)加强mRNA稳定性和翻译效率。
可引入修饰的核苷,如N1-甲基假尿苷(m1ψ)和5-甲基胞苷(m5C),可增强mRNA翻译效率和免疫逃避性能。
多种RNA纯化方式,包括磁珠法和色谱法。
可包封mg级别的高质量mRNA-LNP复合物。
全面的质量控制方案和LNP质量检测。
可针对mRNA大规模制备提供放大工艺开发。
体内与体外验证mRNA基因递送效果
凭借我们的高通量克隆以及测试平台,我们使用实验导向的策略优化mRNA UTR、编码序列以及生产方法。
我们已搭建功能性验证平台,用于抗原呈递、抗体表达、CAR表达以及CRISPR等应用。
我们提供临床导向的CRO服务用于验证mRNA-LNP复合物的递送效率和安全性。使用的动物模型包括啮齿类和非人灵长类。
试验验证
图3和图4对IVT mRNA表达萤光素酶报告基因和EGFP分别进行了体外和体内的功能性测试。
图3 在293T和HeLa细胞中的萤光素酶mRNA和EGFP mRNA的表达效果。使用的mRNA包括无修饰的、N1-甲基假尿苷(N1-methylpseudouridine,m1Ψ)修饰的、以及5-甲基胞苷(5-methylcytidine,m5C)修饰的。细胞生长于12孔板,每孔转染1 ug mRNA。(A)293T细胞转染萤光素酶mRNA后6 h、24 h、48 h的萤光素酶活性。误差线表示标准偏差。EGFP mRNA在293T细胞(B)和HeLa细胞(C)中的转染效果,转染后24 h、48 h以及72 h使用流式细胞术检测。平均荧光强度使用带颜色的柱状图表示,EGFP阳性细胞比例使用圆圈、方块和三角形表示。误差线表示标准偏差。(D)使用荧光显微镜(100x)观察转染EGFP mRNA后72 h的293T和HeLa细胞。
图4 小鼠转导萤光素酶mRNA(Luc mRNA),检测mRNA表达情况和免疫反应。(A)注射后6 h、24 h、和48 h通过活体成像检测萤光素酶活性。(B)为量化外源RNA在小鼠中引发的炎症反应,注射后48小时检测小鼠血清中两种促炎细胞因子IL-6和TNF-α的浓度。误差线表示标准偏差。小鼠种系:C57BL/6J;小鼠年龄:8周;注射方法:肌肉注射。(C)向Balb/C小鼠注射30 ug的LNP包封的mRNA,注射后14天,分离Balb/C小鼠的脾脏细胞,针对病毒抗原A、病毒抗原B以及PBS对照进行IFN-γ ELISpot试验。
技术指标
应用
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