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Tet诱导哺乳动物基因表达慢病毒载体（Tet-On（All-in-One载体系统））
Vectorbuilder
pAAV00[Tet]
亮点
我们的Tet-On诱导基因表达载体旨在在没有四环素的情况下实现GOI的几乎完全沉默，并在添加四环素时实现强而快速的表达。慢病毒诱导基因表达载体来源于第三代慢病毒载体系统。它针对大肠杆菌中的高拷贝数复制、活病毒的高滴度包装、各种细胞的高效病毒转导、高效载体整合到宿主基因组中以及高水平转基因表达进行了优化。
优势
开关基因激活：与在没有诱导的情况下通常具有明显泄漏表达的仅rtTA的Tet-On系统不同，我们的Tet-On基因表达载体充当真正的四环素调节开关，用于控制基因表达，这可以最大限度地减少无诱导的背景表达，并导致四环素诱导的高灵敏度和高动态范围。
高级表达式： TRE启动子可以在诱导状态下驱动GOI的非常高水平表达。
载体DNA的永久整合：传统转染导致DNA几乎完全瞬时递送到宿主细胞中，因为DNA会随着时间的推移而丢失。这个问题在快速分裂的细胞中尤为突出。相比之下，由于病毒载体整合到宿主基因组中，慢病毒转导可以将基因永久递送到宿主细胞中。
高病毒滴度：我们的慢病毒载体可以包装成高滴度病毒。当通过我们的病毒包装服务获得慢病毒时，滴度可以达到>109每毫升转导单位（图/毫升）。在此滴度下，当使用足够量的病毒时，培养的哺乳动物细胞的转导效率可以接近100%。
非常广泛的向性： 我们的包装系统将VSV-G包膜蛋白添加到病毒表面。这种蛋白质具有广泛的嗜性。结果，来自所有常用哺乳动物物种（甚至一些非哺乳动物物种）的细胞都可以被转导。此外，几乎任何哺乳动物细胞类型都可以转导（例如分裂细胞和非分裂细胞、原代细胞和已建立的细胞系、干细胞和分化细胞、贴壁细胞和非贴壁细胞）。神经元通常不受常规转染的影响，可以很容易地被我们的慢病毒载体转导。与我们的系统包装的慢病毒载体比腺病毒载体（对某些细胞类型具有低转导效率）或MMLV逆转录病毒载体（难以转导非分裂细胞）具有更广泛的向性。
基因递送的相对均匀性：通常，病毒转导可以以相对均匀的方式将载体递送到细胞中。相比之下，质粒载体的传统转染可能高度不均匀，一些细胞接收大量拷贝，而其他细胞接收很少拷贝或没有拷贝。
体外和体内有效性： 虽然我们的载体主要用于培养细胞的体外转导，但它也可用于转导活体动物的细胞。
安全：我们载体的安全性由两个功能确保。一种是将病毒包装和转导所需的基因分割成几个辅助质粒;另一种是在载体积分时5' LTR中的启动子活性自失活。因此，在包装和转导过程中基本上不可能出现具有复制能力的病毒。因此，使用我们的载体的健康风险很小。
不足之处
有限的载体空间：野生型慢病毒基因组为~9.2 kb。在我们的载体中，病毒包装和转导所需的组分占据~2.8 kb，剩下~6.4 kb来容纳用户感兴趣的DNA。当载体超过此大小限制时，病毒滴度会严重降低。慢病毒诱导基因表达载体通常用于插入GOI的ORF以外的几种功能元件，例如TRE启动子和耐药盒。大的ORF加上这些额外的元素可能超过6.4 kb，结果可能会影响病毒的产生。
技术复杂性： 慢病毒载体的使用需要在包装细胞中产生活病毒，然后测量病毒滴度。与传统质粒转染相比，这些程序在技术上要求很高且耗时。
技术指标
应用
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