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滚环扩增（RCA）试剂盒
珀罗汀生物
EV0602012
滚环扩增（Rolling circle amplification, RCA）是来源于微生物体内的核酸复制方式，现已发展成为 一种成熟的体外核酸恒温扩增方法。本产品以环状 DNA 为模板，以与模板 DNA 互补的短 DNA 序列为 引物，在 phi29 DNA Polymerase 催化下，可通过聚合反应合成包含多个重复的模板互补序列的单链 DNA。这种方法可以实现对靶核酸的信号放大，广泛用于材料合成、疾病诊断等领域。
适用范围
1. 用于生物医学研究中，对微量核酸进行扩增，以满足后续检测需求，如病原体检测、基因突变检测等。
2. 适用于分子生物学实验中，制备大量的特定核酸片段，用于探针制备、基因克隆等研究。
3. 在生物传感器领域，可作为信号放大手段，提高检测的灵敏度和特异性。
RCA原理示意图
RCA产物验证
试剂组分
产品编号 | 产品名称 | 酶活/体积 |
EV0602012 | phi29 DNA Polymerase | 1000/2000/4000 U |
10×phi29 buffer | 250/500/1000 μL | |
BSA (20 mg/mL) | 25/50/100 μL | |
dNTP mix (10 mM) | 250/500/1000 μL | |
ddH2O | 2/3/6 mL |
使用流程
1. 制备环状模板（若为双链环状 DNA 模板，可省略步骤 1、2，直接进行步骤 3。）
组分 | 浓度 | 体积/μL |
Linear DNA Template | 100 μM | 2 |
Primer | 100 μM | 2 |
NaCl | 800 mM | 2 |
ddH2O | / | 14 |
退火程序：95 ℃，2 min；65 ℃，2 min；每30 s降0.5 ℃，降至20 ℃；或100 ℃加热3 min，静置室温冷却。
2. 连接模板缺口：
组分 | 酶活 | 体积/μL |
Product from the Previous Step | / | 0.67 |
10× T4 buffer | / | 2 |
T4 DNA Ligase | 40 U/μL | 0.17 |
ddH2O | / | Up to 20 |
22 ℃下孵育8 h，或4 ℃过夜，随后在65 ℃下孵育10 min使酶失活。
3. RCA反应：
组分 | 浓度 | 体积/μL |
Circular DNA Template | / | 18 |
dNTP mix | 10 mM | 10 |
10 ×phi29 buffer | / | 10 |
BSA | 20 mg/mL | 1 |
phi29 DNA Polymerase | / | 2 |
ddH2O | / | Up to 100 |
在恒温混匀仪中，37 ℃，450 rpm下反应1~4 h；65 ℃下孵育10 min使酶失活。
注意事项
1. 对于酶的操作需在冰浴上进行，避免在室温放置时间过长而影响酶的活性。
2. 本产品应避免反复冻融。
3. 本产品仅供专业人员科学研究使用。
储存和有效期
-20 ℃保存，有效期6个月。
应用
| 货号 | 名称 | 品牌 | 购买 |
|---|
粤公网安备 44010602000473号
粤ICP备09063491号
营业执照
