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核酸定量的“数字化”革命:ddPCR

2026-08-30

 

 

在分子生物学与精准医疗研究中,核酸的高灵敏度、高精度绝对定量始终是研究者关注的焦点。传统的实时荧光定量PCR(qPCR)依赖标准曲线与参照基因,面对低丰度靶标、稀有突变或复杂样本时,其灵敏度与分辨力常显不足。伯乐(Bio-Rad Laboratories)旗下的微滴数字PCR(ddPCR™)技术,正是为解决这些痛点而生——它把核酸定量从“相对”推向“绝对”,从“估算”升级为“计数”。

一、什么是微滴数字PCR(ddPCR)?

ddPCR的核心思路是“化整为零、逐个计数”。体系经油包水技术被分装为成千上万个纳升级微滴,每个微滴都是一个独立的PCR反应器,含有或不含靶标分子;扩增后通过荧光信号判读阳性与阴性微滴,再依据泊松分布统计学原理,即可计算出靶标分子的绝对拷贝数,无需任何标准品。

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二、ddPCR的核心优势

● 绝对定量,无需标准曲线 —— 直接报告靶标拷贝数/µl,消除标准品批次与扩增效率差异带来的系统误差,结果客观、可跨实验室比较。

● 超高灵敏度与分辨率 —— 可稳定检测低至0.001%的稀有等位基因,并可分辨1.2–1.3倍的拷贝数微小差异,远优于qPCR。

● 抗抑制剂、耐受复杂样本 —— 微滴分区大幅稀释抑制效应,对血液、组织裂解物、石蜡切片等复杂样本更加友好。

● 卓越的精密度与重现性 —— 系统经澳大利亚国家计量研究院(NMI)认证,批内批间结果稳定可靠。

三、三大平台,按需选择

从经典双色到六色高通量、再到全自动一体机,Bio-Rad ddPCR™平台覆盖不同实验室的应用与通量需求:

三大平台均与QX200体系的试剂、检测与耗材兼容,实验方案可平滑迁移、升级。

四、核心应用场景

1. 肿瘤液体活检与稀有突变检测高灵敏检测ctDNA中的驱动基因突变(如EGFR、BRAF),助力靶向用药指导与耐药监测。

2. 拷贝数变异(CNV)分析精准解析基因拷贝数差异与杂合性缺失,是肿瘤与遗传学研究的重要工具。

3. 低丰度基因表达定量无需标准曲线,即可对微量RNA的微小倍数变化进行精确定量。

4. NGS文库质控与正交验证对NGS文库精确定量并验证测序结果,有效降低假阳性。

5. 病原体与病毒检测实现痕量病原体核酸的绝对定量,广泛应用于传染病监控与废水环境监测。

6. 细胞与基因治疗用于病毒载体滴度测定、基因组编辑确认与残留DNA检测。

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五、配套试剂,一站式闭环

从ddPCR Supermix for Probes、EvaGreen ddPCR Supermix,到经过严格验证的PrimePCR™ ddPCR检测试剂盒,Bio-Rad提供从样本到结果的完整试剂解决方案,确保实验方案的可重复性与数据质量的可靠性。