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SCALEVIEW® 组织透明化试剂A2

2017-10-17

2514694138412242.jpg生物体组织透明化新技术

SCALEVIEW®-A2

宮脇敦史博士等人开发了一种水溶状态下不会损坏荧光蛋白,可简便使生物体组织透明化的方法。

对于福尔马林固定的样本,SCALEVIEW®-A2是不破坏其光吸收和荧光,同时可减少光散射的水溶性溶液。仅需将哺乳类动物大脑等生物体组织浸泡于SCALEVIEW®-A2中,即可透明化。

SCALEVIEW®-A2光学特性——折射率ne(20℃)为1.377-1.381。

HP数据:理化学研究所 脑科学综合研究中心细胞机能探索技术开发小组濱裕先生、宮脇敦史提供

合作:奥林巴斯(Olympus)株式会社

参考文献:Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

 

◆SCALEVIEW®-A2 操作案例

以透明化小鼠大脑为样本,SCALEVIEW®-A2透明化方法操作如下:

1. 固定

① 用4% 多聚甲醛(PFA)/PBS(pH 7.5~8.0)对小鼠进行灌流固定。

② 取出小鼠大脑后,用4%PFA/PBS固定(4℃、10h), 20% 蔗糖/PBS置换(4℃、24h)。

③ 用OCT复合物对小鼠大脑进行包埋处理后,液氮进行冷冻。

④ 用PBS对冷冻脑组织解冻、清洗后,再用4% PFA/PBS进行再固定(室温、20min)

2. 透明化处理

⑤ 将固定好的小鼠大脑浸泡在SCALEVIEW®-A2中(室温)。

注意点:
1.每个成年小鼠大脑需要使用30mL以上的SCALEVIEW®-A2。

2.透明化需要1周以上时间。浸泡过程中,需在混匀器等设备中慢慢轻晃溶液。每天更换一次

2.SCALEVIEW®-A2溶液,效果更佳。

3.通过SCALEVIEW®-A2溶液浸泡后,小鼠大脑体积会单方向膨胀10~30%水平。

 

3. 观察

⑥ 观察SCALEVIEW®-A2处理后的小鼠大脑样品使用双光子激光显微镜、奥林巴斯(Olympus)公司

XLPLN25SVMP多光子专用物镜。或使用激光共聚焦显微镜进行观察。

⑦ 观察结束后,可将小鼠大脑再次浸泡于SCALEVIEW®-A2溶液中,保存温度4℃。

SCALEVIEW®-A2处理案例

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图1. SCALEVIEW®-A2透明化小鼠大脑案例

从左往右: SCALEVIEW®-A2处理前的小鼠大脑;SCALEVIEW®-A2浸泡两周后的小鼠大脑

SCALEVIEW®-A2观察案例

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图2. 双光子激光显微镜下获取的Thy1-H小鼠大脑深层观察图像

使用奥林巴斯(Olympus)公司XLPLN25XWMP多光子专用物镜观察图像

比例尺:50μm

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图3. 双光子激光显微镜下获取的Thy1-H小鼠大脑深层观察图像

使用奥林巴斯(Olympus)公司XLPLN25XSVMP(NA.1.0 WD4mm)多光子专用物镜观察图像

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图4. 激光共聚焦显微镜下获取的小鼠胰脏透明化图像

对小鼠进行灌流固定处理前,先使用Lectin Texas red对流入血管进行标记处流固定后,取出胰脏并用SCALEVIEW®-A2图为奥林巴斯(Olympus)公司:UPLSAPO30XS察下的

相关视频(欲观看视频请点击文字

YFP-H小鼠海马部成像视频

使用奥林巴斯(Olympus)公司XLPLN25XSVMP(NA1.0,WD4mm)多光子专用物镜观察图像

YFP-H小鼠大脑的成像视频

使用奥林巴斯(Olympus)公司XLSLPLN25XSVMP(NA0.90,WD8mm)多光子专用物镜观察图像