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POROS Oligo DT(25)亲和填料—mRNA捕获的引导者

2022-04-22

 

 

mRNA疫苗开启了人类挑战疾病的新方式,甚至会改变医药行业的格局。我认为基于mRNA疫苗和药物的基础研究甚至有可能获得诺贝尔奖。”纽约大学王俊教授这样评价到(相关文章发表于《新英格兰医学杂志》)。

2021年8月23号,德国生物科技公司拜恩泰科宣布,其与辉瑞联合研发的mRNA新冠疫苗Comirnaty(中文商品名:复必泰)获批美国药监局(FDA)的生物制品许可证申请(BLA)。该疫苗适用于16岁及以上的人群,以预防新冠病毒的感染。

该款疫苗是获得FDA完全批准的首款mRNA新冠疫苗,也是全球首个完全获批的拥有完整三期临床数据的新冠疫苗。BioNTech表示,Comirnaty自2020年12月11日在美国获得紧急使用授权以来,已向全球120多个国家或地区提供了逾12亿剂该新冠疫苗。

从2020年1月开始研发,到首次获得FDA批准,新冠疫情催生的mRNA疫苗的大放异彩,使其从默默无闻到一战成名。





RNA的任务是在核糖体中将DNA翻译后合成蛋白,人工合成的mRNA疫苗为核糖体提供病原体抗原的遗传信息,发布合成病原体抗原的构建指令。蛋白抗原合成后,激发机体的免疫系统识别并清除具有这些蛋白特定表面特性的病原体。

从结构上来看,mRNA疫苗可分为两大类:自扩增性mRNA(self-amplifyingmRNA)和非复制型mRNA(non-replicatingmRNA)。无论是哪一种,都具有5‘和3’端的非翻译区(untranslatedregions,UTRs),开放阅读框和一个3’端的poly(A)尾巴。

自扩增mRNA通常来源于正链RNA病毒的基因组,它既编码目的抗原,又编码细胞内RNA扩增和高水平抗原表达所需的病毒非结构蛋白。非复制型mRNA一旦进入细胞并从核内体释放到细胞质中,mRNA立即被翻译;

mRNA疫苗的关键质量参数包括:

  • poly-A尾巴的长度,poly(A)尾与poly(A)结合蛋白结合形成复合物,启动蛋白的合成(翻译),并可通过降解脱帽酶(decapping enzymes)保护cap结构;

  • UTR的结构和长度,这是影响mRNA翻译效率的主要的因素;

  • mRNA的纯度;

  • 5’加帽的效率和结构,Cap的结构和mRNA的稳定性密切相关;

  • 编码区的序列。

这些都会影响mRNA胞内目的基因的表达。





目前业内常用的mRNA纯化方法包括,离子、分子筛和反向三种,离子交换层析的分辨率有待提高。分子筛的载量较低,反向使用较为广泛,但其常常需要加入离子对,载量较低,且需要使用易燃、有毒有害的溶剂,不适用于生物制药。

POROS™Oligo(dT)25亲和填料,专门应用于mRNA的捕获纯化。该填料采用聚苯乙烯-二乙烯基苯多聚体硬质基质,表面通过Linker键合25个dT配基,特异性捕获mRNA的PolyA尾巴,能极大提高mRNA在捕获阶段的效率和载量。

此外,POROS Oligo(dT)25 拥有诸多优势:NaCl上样,水洗脱;回收率>90%;出色的放大性;无动物源性。

据此,我们可将mRNA的纯化工艺设计为如下所示:





与常规的核酸纯化柱相比,POROS Oligo(dT)25的载量更高,除杂效率更好,下图为使用HPLC法分析用不同方法纯化的mRNA的纯度,POROS Oligo (dT)25对杂质有较高去除率。





为方便大家的使用,我们也提供预装柱和各种规格的散装填料。








技术咨询:李经理15121038345

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渠道合作:顾经理13564627120