微信下单
仪器云展台

当前位置:首页 > 动态

上海逐典生物科技有限公司

上海市闵行区紫星路588号2幢6层601A
021-5223 8066

技术交流

扫描二维码

逐典小课堂丨细胞消化知多少——胰蛋白酶的大用处

2022-07-15

 

1657874575206695.jpg

自实体组织分离是动物细胞的主要来源,目前生物制药领域应用广泛的细胞株如CHO细胞、293细胞、Vero细胞等最初均分离自不同动物的组织器官。那如何最有效分离出想要的单细胞呢?无论是原代细胞获取还是成熟细胞株的消化传代,细胞消化都是关键的一环,今天逐典给大家整理一篇细胞消化大全,方便您更好的选择适合自己实验的产品。


细胞消化在不同领域的应用

1. 原代细胞

直接从生物体获取的组织更接近于生物体内的生活状态,且生物性状尚未发生很大改变,因此在药物筛选、细胞移植、类器官培养、肿瘤研究等众多领域备受欢迎。针对不同组织采用不同的消化酶能使解离过程更加高效,酶解法也是主要的细胞解离方式,主要以胰蛋白酶为主,辅助添加其他蛋白酶增强活力。

逐典小课堂丨细胞消化知多少——胰蛋白酶的大用处


2.细胞传代

以单层生长的细胞彼此之间以及与培养皿发生蛋白质接触,一般细胞长至80%-90%密度需要传代消化,贴壁细胞传代前,需要把细胞用消化试剂从培养容器表面解离出来,细胞得以分离成单个悬液传代至含新鲜培养基的新容器内。消化方法以酶解法为主,胰蛋白酶是最常用的解离试剂。

逐典小课堂丨细胞消化知多少——胰蛋白酶的大用处

图2.不同培养规模的细胞传代

通常的细胞消化策略:

  • 小规模的细胞收集可使用吹打或细胞刮刀

  • 形成蛋白紧密连接的,可采用胰蛋白酶

  • 上皮细胞等可表达钙粘蛋白的细胞,在酶消化基础上需添加EDTA等螯合剂

为了保持细胞活力,消化反应条件应与细胞接触的强度相匹配。

逐典小课堂丨细胞消化知多少——胰蛋白酶的大用处


如果将反应强度与细胞系的粘附特性相匹配,但细胞仍难以去除,则在生长培养基中可能存在抑制胰蛋白酶的元素,例如血清,可以通过在添加解离试剂之前用PBS简单地冲洗细胞一次或两次来克服。此外,形成特别强的多层细胞融合也是需要注意的。

毫无疑问,胰蛋白酶作为原代细胞获取、细胞传代消化中必不可少的原料之一,在生物制药工艺中也是重要的生产原辅料。应用于生物制药工艺意味着更高的质量标准,动物来源、药典要求、生产级别、批间稳定性等都是胰蛋白酶产品的重要指标!

逐典Trypelectase重组胰蛋白酶和Tryplus消化液作为专注细胞消化领域的胰酶产品,专门为工艺和生产设计。

Trypelectase非动物源重组胰蛋白酶干粉产品,方便生产大规模配置,存储、转运更方便。还有高稳定性且即开即用的TrypLUS消化液,高封闭性满足细胞消化领域的不同规模需求。

1657874620381988.png

Trypelectase重组胰蛋白酶特点

  • 符合药典中重组胰蛋白酶的相关标准

  • 生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全符合GMP指导原则

  • 重组生产,生产过程部使用任何动物来源原料,无外源性病毒污染,使用安全

  • 批量生产,可以保证稳定连续的批次生产,产品批次间无差异,质量稳定

  • 纯度高,不含杂酶,宿主蛋白和宿主细胞DNA残留量符合药典标准

逐典小课堂丨细胞消化知多少——胰蛋白酶的大用处


TrypLUS消化液特点

  • 纯度高,酶切特异性好,减少多种酶裂解造成的细胞损伤

  • 2-8℃可稳定保存24个月,室温也可稳定放置,节省冰箱存储空间

  • 直接替代胰蛋白酶消化流程,培养基稀释即可,无需酶活抑制剂

  • 没有动物来源成分,极大程度上减少外来污染

  • 应用范围广,适合有血清或无血清环境的细胞消化

逐典小课堂丨细胞消化知多少——胰蛋白酶的大用处



欢迎致电联系!

技术咨询:李经理15121038345

销售咨询:李经理18768160320

渠道合作:顾经理13564627120

咨询热线:苏经理18521301252

更多精彩内容,请点击上海逐典生物官网了解~


image.png