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活体成像 | 生物发光和荧光发光的选择和应用
一,发光原理
1,生物发光
用荧光素酶基因标记DNA,利用其产生的蛋白酶与底物发生反应,产生体内自发光信号。
2,荧光发光
荧光染料、探针、蛋白受一定波长的激发光激发后,发射出波长大于激发光波长的荧光信号。
二,操作方法
生物发光
1、前期需将荧光素酶基因整合到细胞染色体DNA上以表达荧光素酶,包括构建荧光素酶重组质粒,细胞转染,筛选阳性克隆细胞株。
2、每次成像前需要注射底物荧光素,实验成本高。
荧光发光
1、前期可根据实验需求选择合适的荧光染料、荧光探针、荧光蛋白等,对不同的目标基因、蛋白、抗体、化合物等进行标记。
2、成像前无需注射底物,有合适的激发光源照射,就可发出特定波长的发射光,只要荧光基团稳定,就可实现随时激发、发光、检测。
三,应用范围
生物发光
企业文化,或称组织文化,是一个组织由其价值观、信念、仪式、符号、处事方式等组成的其特有的文化形象,简单而言,就是企业在日常运行中所表现出的各方各面。
荧光发光
光信号可能会随着细胞的生长繁殖或实验周期延长逐渐减弱。但需保持荧光基团稳定才可稳定发光,在活体或离体组织器官进行观察。
具有更多灵活的标记探针可选,应用范围更广,适合瞬时观测实验,如药物、细胞在体内的分布、靶向和代谢,疾病标记物的靶向监测等。
生物发光不同于荧光发光,依靠酶促反应产生自发光信号,无需激发光,背景低,信噪比高(相差2-3个数量级),灵敏度高,且发光强度与检测目标有良好的线性关系,可进行准确定量。前期涉及转基因操作,实验难度较高,实验过程中需要消耗底物荧光素,实验成本较高,应用范围较小。
四,逐典D-萤光素钾盐优势
1.高纯度(HPLC验证纯度≥99%)
2.优异的生物发光性能
3.高溶解度(>40mg/ml)
五,应用场景
D-荧光素钾盐在不同领域具有多种应用场景。其中包括蛋白表达研究、抗肿瘤或抗病毒药物研究以及mRNA疫苗开发等。
蛋白表达研究:将Luc基因插入需要研究的蛋白中,可用于定量目标蛋白在实验动物体内的表达情况。
抗肿瘤或抗病毒药物:在肿瘤细胞或病毒中导入Luc基因,建立肿瘤或病毒感染小鼠模型,注射药物后,通过活体成像技术观测肿瘤大小或病毒感染的变化。
mRNA疫苗开发:在mRNA中插入Luc基因,脂质体包裹后注射实验动物后,可通过活体成像技术可观测疫苗的免疫效果。
六,应用案例分享