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都4202年了，你还不会贴壁细胞培养嘛？
一、贴壁细胞培养介绍
细胞培养技术在现代生物学、医学研究以及生物技术领域中具有举足轻重的地位。其中，贴壁细胞培养作为一种常见的细胞培养方式，对于研究细胞的生理、生化特性以及疾病机制等方面发挥着重要作用。
贴壁细胞是指在体外培养条件下，需要依附于特定的支持物表面才能生长和增殖的细胞类型。这些细胞通常来源于组织或器官，具有特定的形态和功能特征。常见的贴壁细胞包括成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞等。贴壁细胞培养的优点在于能够更好地模拟细胞在体内的生长环境，有助于维持细胞的正常形态和功能。通过贴壁细胞培养，研究人员可以深入研究细胞的生长、分化、代谢以及对药物和外界刺激的反应。
二、贴壁细胞培养的实验流程
（一）准备工作
1. 培养室的清洁与消毒：确保培养室处于无菌状态，定期对环境进行清洁和消毒。
2. 培养器具的处理：培养瓶、培养皿、移液器等器具需要经过严格的清洗、烘干和灭菌处理。
3. 培养基的配制：根据细胞类型选择合适的培养基，并添加所需的血清、生长因子等成分。
（二）细胞的复苏
1. 从液氮中取出冻存的细胞管，迅速放入 37℃水浴中，轻轻摇动使其快速解冻。
2. 将解冻后的细胞悬液转移至离心管中，加入适量的培养基，离心去除冻存液。
3. 将细胞重悬于新鲜培养基中，接种到培养瓶或培养皿中。
（三）细胞的培养
1. 将接种后的细胞放入培养箱中，设置合适的温度（通常为 37℃）、二氧化碳浓度（一般为 5%）和湿度。
2. 定期观察细胞的生长状态，包括细胞形态、密度等。
（四）细胞的传代
1. 当细胞生长达到一定密度时，需要进行传代。首先吸出旧的培养基，用 PBS 溶液清洗细胞。
2. 加入适量的消化液（如胰酶和重组胰酶类似物），在显微镜下观察细胞变圆、脱落后，加入含血清的培养基终止消化。
3. 将细胞悬液离心，去除上清液，重悬细胞于新鲜培养基中，按照适当的比例接种到新的培养容器中。
（五）细胞的冻存
1. 选择处于对数生长期、生长状态良好的细胞进行冻存。
2. 消化收集细胞，离心后用冻存液重悬细胞，并分装到冻存管中。
3. 将冻存管放入程序降温盒中，按照一定的降温速率降至 -80℃，然后转移至液氮中长期保存。
三、贴壁细胞培养注意事项
（一）无菌操作
1. 在整个实验过程中，严格遵守无菌操作原则，避免微生物污染。
2. 操作前对手部和实验器具进行消毒，在超净工作台内进行细胞操作。
（二）培养环境
1. 保持培养箱内温度、二氧化碳浓度和湿度的稳定。
2. 定期检查培养箱的性能，确保其正常运行。
（三）细胞观察
1. 每天观察细胞的生长状态，包括形态、密度、有无污染等。
2. 及时发现问题并采取相应的措施，如调整培养条件、处理污染等。
（四）培养基和血清
1. 选择合适的培养基和血清，并注意其保质期和质量。
2. 定期更换培养基，避免营养成分的耗尽和代谢产物的积累。
（五）消化操作
1. 控制消化液的浓度和作用时间，避免过度消化损伤细胞。
2. 消化过程中在显微镜下密切观察细胞状态，及时终止消化。
（六）细胞传代
1. 按照适当的比例进行传代，避免细胞过度稀疏或过度密集。
2. 传代后的细胞需要一定的时间来适应新的环境，注意观察其生长情况。
四、细胞消化方案和对比
（一）胰酶消化法
优点：
广泛适用性：适用于大多数贴壁细胞。
消化效果显著：能够快速使细胞从培养表面解离。
缺点：
可能损伤细胞：过度消化或消化时间不当可能对细胞造成损害。
对细胞表面蛋白有影响：可能破坏细胞表面的某些蛋白结构。
（二）胶原酶消化法
优点：
温和性：对细胞的损伤相对较小，尤其适用于原代细胞。
保持细胞完整性：有助于维持细胞的形态和功能。
缺点：
消化时间长：通常需要较长的时间才能达到理想的消化效果。
成本较高：胶原酶的价格相对较高。
（三）胰酶-EDTA 混合消化法
优点：
增强消化效果：结合了胰酶和 EDTA 的作用，提高解离效率。
缩短消化时间：相比单独使用胰酶，可能减少消化所需的时间。
缺点：
EDTA 潜在影响：EDTA 可能对细胞内的离子平衡产生一定干扰。
（四）EDTA 消化法
优点：
相对温和：对细胞的损伤较轻微。
不破坏蛋白：对细胞表面蛋白结构影响较小。
缺点：
消化能力较弱：单独使用时，可能无法完全解离细胞。
五、重组胰酶类似物的介绍
重组胰酶类似物是通过现代生物技术手段，利用基因工程和重组 DNA 技术生产的一种蛋白酶。它的设计旨在模拟天然胰酶的消化功能，但在性能和特性上进行了优化和改进。
重组胰酶类似物通常是在特定的微生物宿主（如大肠杆菌、酵母等）中进行表达和生产。通过基因工程技术，可以对胰酶的基因进行改造，以获得具有特定性质的酶蛋白，如更高的活性、更好的稳定性、更低的免疫原性等。
与传统的天然胰酶相比，重组胰酶类似物在生产过程中能够更好地控制质量和纯度，减少杂质和变异性的影响。这使得其在细胞培养、生物制药以及生物技术研究等领域具有更广泛的应用前景。
六、重组胰酶类似物进行细胞消化的优点是什么
（一）高效消化
具有较高的酶活性，能够快速有效地使贴壁细胞从培养表面解离。缩短消化时间，提高实验效率。
（二）温和性
对细胞的损伤相对较小，有助于维持细胞的活力和功能。
减少因消化过程导致的细胞凋亡和死亡。
（三）质量稳定
由于是通过基因工程生产，其质量和活性更稳定，批间差异小。为实验结果的可重复性提供保障。
（四）纯度高
减少杂质的存在，降低对细胞的潜在不良影响。提高细胞培养的成功率和质量。
（五）易于控制
可以根据实验需求精确调整使用浓度和消化时间。更好地适应不同类型的贴壁细胞和实验条件。
七、逐典生物 TrypLUS 重组胰酶类似物消化液介绍
逐典生物TrypLUS 消化液是一款即开即用、可常温放置的无动物源的胰酶替代物。利用微生物重组表达的胰蛋白酶类似酶，对传统胰蛋白酶在稳定性、纯度以及使用便捷度上实现了超越。 TrypLUS 消化液具有高效的消化能力，能够在较短的时间内使贴壁细胞从培养容器表面解离，同时最大程度地减少对细胞的损伤。
其特点包括：
1、室温保存无压力，释放冰箱冻存空间，为物料保存节能增效
4℃甚至室温条件下可长期保存，在稳定性方面实现了对胰蛋白酶的超越；37℃下存放3周，仍保持80%的酶活性。
图1.TrypLUS消化液稳定性研究数据
2、超纯、高效成就更好的品质
TrypLUS消化液稳定不会自切，对细胞的消化更高效可控，稳定性与高纯度成就更好的产品性能。
图2.RP-HPLC酶纯度检测，A.猪胰蛋白酶典型色谱图；B.TrypLUS消化液色谱峰图和纯度
3、简单温和，实现细胞消化方法无缝切换
TrypLUS消化液的贴壁细胞消化流程与胰蛋白酶操作一样，但无需血清中和及消化终止，可做到同类产品的无缝切换。在性能的基础上，细胞消化更加温和，细胞活率有保证！
图3.TrypLUS消化液对HEK293FT细胞的消化过程及传代24h细胞贴壁图片
订货信息
【关于逐典】
上海逐典生物科技有限公司，坐落于中国（上海）自由贸易试验区，获得ISO9001质量体系认证，是一家从事重组蛋白研发和销售的高新科技企业。
逐典生物始终秉持以客户为中心的理念，针对重组蛋白的结构设计、纯化工艺及其稳定剂型相关的多项关键技术进行优化和突破。专业定向蛋白变复性技术，可将大肠杆菌大量表达的变性固体蛋白转变成高活性可溶性蛋白。凭借技术优势，逐典生物新品研发周期短且可控性强，为重组蛋白的高质高效研发提供保障，为企业生产降本增效。
公司自成立以来成功开发百余种高活性细胞因子及多种高活性蛋白酶，覆盖细胞培养、病毒纯化以及质量分析等生物工艺各个环节。可广泛应用于科研、医药生产及IVD（体外诊断试剂）等领域，满足各类用户所需。
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